通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR快速检测试剂盒

　　商品名称：无

　　汉语拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

　　英文名称：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

　　【主要成分与含量】

　　序号成分含量

　　PCR反应液2Solution A管(5ml/管)

　　3Solution B管(5ml/管)

　　4 1管(0.5ml/管)

　　5 说明书·组织样品处理：分别从猪肉组织、淋巴结、脾脏不同位置取样，用手术剪剪碎混匀后取0.1g于研磨器中研磨，加入1.5ml生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5ml无菌离心管，12000 r/min离心2分钟，取上清200μl备用。

　　·根据不同的样本类型，按照下表准备相应的样本用量。

　　·样本充分裂解后(95℃金属浴振荡孵育的样本需恢复室温)，加入下表推荐体积的Solution B，并涡旋震荡30 s，12000rpm离心2min，上清即为模板DNA。

　　样本用量处理温度及时间全血100 μl100 μl

　　唾液00ul100 μl

　　1个95℃，3-5min10 μl室温静置3-5min备注：组织样本加入10倍体积的生理盐水制成组织匀浆液后，可按照血液样本的处理方法进行处理。

　　1.1.3可利用商品化试剂盒提取核酸进行反应，效果更佳

　　1.2 荧光PCR扩增

　　1.2.1 试剂准备

　　按下表1体系，在配套PCR管中配制反应体系，盖紧管盖后瞬时离心10秒，转移至扩增区。

　　PCR反应液预准备的模板(样本/对照)20μl

　　1.2.3 PCR扩增

　　表2 仪器PCR扩增参数

　　温度循环数

　　95℃1

　　95℃40

　　20 s(采集荧光信号)

　　·阴性对照：无Ct值，线形为直线或微斜，无明显指数增长。

　　·样本检测结果Ct值≤38，有明显指数增长，判定为阳性，表明样本中检测出非洲猪瘟病毒。

　　·样本检测结果无Ct值，判定为阴性，表明样本中未检测出非洲猪瘟病毒。

　　【注意事项】

　　(1)实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按步骤执行，不使用本试剂盒提供的组份或不按照说明书进行实验可能导致错误结果。

　　(2)所有试剂应在规定温度储存。-20℃保存的试剂在使用前应充分混匀。试剂盒反复冻融次数不宜超过5次。

　　(3)实验操作应按照国家有关临床基因扩增实验室管理规范执行，实验过程应分区(试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区)，各区物品为专用，不得交叉使用，避免污染。

　　(4)操作台、移液器、离心机等仪器用品应经常用1%次氯酸钠、75%乙醇或紫外灯进行消毒。耗材应进行无酶处理。

　　(5)待检样本、试剂盒组份及实验中的废弃物需按照具有潜在传染性物质处理方法进行处理。

　　(6)为防止荧光干扰，应避免使用含荧光物质的手套，避免用手直接接触，预防交叉污染。

　　(7)检测结果为阴性，并不完全代表为非感染状态，具体诊断需结合兽医临床。

　　(8)产生假阴性的可能原因为：待检样本在采集、运输、保存及核酸提取过程中操作不当造成DNA降解;样本中核酸浓度低于最低检测限;病毒待测靶基因出现变异;未经验证的其他干扰因素。

　　(9)产生假阳性的可能原因为：待检样本采集、运输及核酸提取过程中发生交叉污染。

　　【规格】 50反应/盒

　　【贮藏及有效期】 试剂盒-20℃以下冷冻避光保存，有效期为12个月。